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        抗體制備方法

         更新時間:2019-05-29 點擊量:752
           抗體制備方法
         
          制備出效價高,特異性強,穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎,抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗,不同的免疫學實驗方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE,WB等)對抗體的效價,濃度和純度有不同的要求。我們知道,一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體,血清蛋白以及其他各種雜蛋白等,在制備特異性抗體過程中當抗體的效價達到實驗預期之后,我們所制備的抗體的純度關鍵取決于所選擇的純化方法。下面就一一介紹常用抗體純化方法及其相關原理。
         
          沉淀法
         
          硫酸銨/辛酸沉淀法是純化抗體傳統的方法之一,被廣泛用于血清和腹水抗體的濃縮和粗純,此方法可大規模粗純抗體,但純化后純度不高,還需配合其它方法繼續純化。通常是將飽和硫酸加入血清或腹水中,將抗體沉淀下來,然后在溶解沉淀繼續下一步的純化。辛酸沉淀抗體通常要先將腹水或血清的pH調4.8,然后緩慢的滴加辛酸,是蛋白沉淀,抗體在上清中,上清繼續下一步的純化。
         
          離子交換層析
         
          離子交換層析也常用于抗體的純化,通量大,工業上用離子交換層析成本低,主要用于除去非抗體蛋白,及用親和層析純化時混入的Protein A/G等親和填料脫離的配基,內毒素的去除等。離子交換純化時,根據抗體的pI選擇合適的離子交換類型,在pI未知時可以分別用陰陽離子交換填料去試驗。
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