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        抗體的“存“和“取“

         更新時間:2022-05-16 點擊量:782

        一、抗體的簡介
        抗體是一些淋巴細胞直接抵抗外來分子所產生的蛋白質,它們是免疫系統的重要組成成分,是實驗室的重要工具??贵w有兩個成員:多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是用抗原注射動物產生的,針對相同蛋白質的不同抗原決定簇直接產生的各種不同親和性的多種免疫球蛋白的混合物。單克隆抗體是在體外制備的,是免疫淋巴瘤細胞與分泌抗體的漿細胞融合后產生的,整個培養只產生一種抗體(常是IgG) ,直接抵抗外來物。
        二、抗體的作用

        抗體可以用放射性元素或者酶來標記,可以讓它們所識別的蛋白質變成可見的或者是可以定量的。
        1)染色細胞:標記抗體可以用來定位細胞蛋白質。
        2)免疫沉淀:抗體可以用來檢測抗原是否存在以及其功能。

        表一  免疫化學技術、多克隆抗體和單克隆抗體

        技術

        多克隆抗體

        單克隆抗體

        共聚單克隆抗體

        細胞染色
        免疫共沉淀
        免疫印跡
        免疫親和純化

        一般好
        一般好
        一般好

        抗體依賴
        抗體依賴
        抗體依賴
        抗體依賴

        很好
        很好
        很好

        免疫方法




        標記抗體
        標記抗原

        困難
        一般好


        抗體依賴

        很好
        很好

        3)免疫印跡:就是我們所知道的免疫印跡法,蛋白質是否存在以及數量都可以在濾膜上通過樣品的免疫來檢測出。
        4)免疫親和:抗體所針對的蛋白質可以直接被分離和純化。
        三、抗體的貯藏

        1)抗體最好貯藏在-20℃分裝,凍融對于大多數抗體都不好。

        2)分裝好的抗體可以在4℃保存至少6個月。

        3)加上疊氮鈉至終濃度0.02%來阻止細菌的生長。

        四、注意事項

        1)要知道你的抗體是由什么動物產生的,方便后續決定用什么樣的二抗。多克隆抗體通常用兔或者猴子,單克隆抗體通常用小鼠、大鼠和倉鼠。
        2)使用前離心去除所有的沉淀,在一些操作中可以阻止高背景。
        3)A蛋白,從S. aureus 細胞壁中分離到的42 kDa的多肽;G 蛋白,從β溶血鏈球菌中分離到的30-35 kDa 的多肽,都與抗體有強烈的結合,它們被用來免疫沉淀或者定位抗體。A蛋自和G蛋白都可以用來與珠子結合或者標記,適用于大部分的抗體亞類。

         


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