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        Coriell人類基因組DNA標準品(NA12878)定量方法

         更新時間:2023-11-08 點擊量:45

        一、DNA是如何提取的?

        2019年之前,使用Qiagen Autopure LS儀器或通過改良的Miller鹽析法手動從新鮮血液、唾液、永生化淋巴細胞和成纖維細胞中純化基因組DNA。自201911日起,gDNA的分離使用自動磁珠純化法(Hamilton Microlab STAR利用PromegaReliaPrep大容量HT分離系統)或手動使用改良的Miller's鹽析程序。

        二、DNA質量控制是如何進行的?

        DNA濃度通過A260處的分光光度吸光度測定,使用1O.D.相當于50 ug/ml雙鏈DNA的慣例或Oubit dsDNA BR測定法,一種基于染料的熒光方法,取決于存儲庫。為了評估DNA完整性,使用Agilent TapeStation評估DNA。TapeStation軟件確定DNA完整性數字(DIN)作為gDNA完整性的度量。

        6個常染色體微衛星標記的多重PCR方法驗證了DNA樣品的一致性。在同一反應中,用一對額外設計的引物擴增X染色體和Y染色體釉原蛋白基因之間的等位基因差異區域來確定性別。

        三、DNA樣本的濃度和體積是多少?

        Coriell運送的大多數樣本在300-375 ng/ul之間,但不同的存儲庫是不同的。每個DNA樣品的濃度可在隨貨件一起提供的濃度表上找到。請注意,對于不同的存儲庫,濃度是由不同的方法確定的。

        四、應該如何重新測試DNA濃度?

        我們建議使用Nanodrop或傳統的基于cuvelte的分光光度計,TE作為合適的樣品空白。DNA濃度可以根據A260值使用1.0 D.相當于50ug/ml雙鏈DNA的慣例來計算。

        Qubit@dsDNA BR測定(Q32850:ThermoFisher Scientific)也可用于測定DNA濃度。該測定使用超靈敏熒光核酸染色,用標準熒光計和熒光素激發和發射波長定量溶液中的雙鏈DNAdsDNA)。

        更多有關Coriell人類基因組DNA標準品(NA12878)的定量方法,請聯系北京百奧創新科技有限公司。


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