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        細胞增殖檢測(MTT檢測)服務

         發布時間:2019/2/28 點擊量:1308

        MTT實驗方法簡介
               MTT法,是一種檢測細胞存活和生長增殖的方法。
               檢測原理:活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO )能溶解細胞中的甲瓚,用酶標儀在490nm波長(或其他波長)處測定其光吸收值,在一定細胞數量范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。
               該方法靈敏度高、經濟實用,已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模藥物篩選、細胞毒性試驗以及細胞放射敏感性測定等等。
         
         
        操作方法
        貼壁細胞
        1、收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度1000-10000孔,(邊緣孔用無菌PBS填充)。
        2、5%CO2,37℃孵育,細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上,細胞貼壁后即可加藥,或兩小時,或半天時間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5-7個梯度,每孔100ul,設3-5個復孔.建議設5個,否則難以反應真shi情況
        3、5%CO2,37℃孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。
        4、每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應,可先離心后棄去培養液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養液。
        5、終止培養,小心吸去孔內培養液。
        6、每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
        7、同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)
         
        懸浮細胞
        1、收集對數期細胞,調節細胞懸液濃度1×106/ml,按次序將①補足的1640(無血清)培養基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培養液稀釋 l?g/ml,需預試尋找*稀釋度,1:10-1:20);③需檢測物10ul;④細胞懸液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(邊緣孔用無菌水填充)。每板設對照(加100?(儲存液100 1640)。
        2、置37℃,5%CO2孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。
        3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),繼續培養4 h。(懸浮細胞推薦使用WST-1,培養4 h后可跳過步驟4),直接酶聯免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值)
        4、離心(1000轉x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值。
        5、同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜),每組設定3復孔。
         
        結果示例
         
         
        客戶提供
        1、實驗信息,包括細胞類型,細胞處理藥物和條件。
        2、實驗結果要求等。
          
        服務流程
        1、提交項目課題相關需求和資料。
        2、與我們的專業技術團隊討論項目細節。
        3、根據討論后的意見對實驗方案進行修改。
        4、雙方均滿意并達成一致,簽訂技術服務合同。
        5、開展實驗,按期完成合同規定的內容。
        6、結題,提供實驗原始結果和分析結果、實驗流程、實驗條件等等。
          
        我們的優勢
        1、多種細胞類型供實驗需要,包括各種腫瘤細胞系,基因敲除細胞等等。
        2、專業的操作人員。
        3、高規格實驗室。
        4、數據結果交付周期快。
         
        咨詢與訂購
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